革兰染色液的操作步骤

1.

涂片固定

菌液涂片时不可过于浓厚，干燥、固定。固定时通过火焰

1-2

次即可，不可过热，以载玻片

不烫手为宜。

2.

染色

一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：

（1）加上结晶紫后，染色

1

分钟，水洗。

（2）加上碘液后染色

1

分钟，水洗。

（3）加上

95%酒精,摇动玻片,根据涂片厚度,脱色约

20-60

秒，水洗，吸去水分。

（4）加上蕃红后，染色

1

分钟，水洗。

（5）吸干或在空气中凉干后，油镜镜检。

革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程度，如脱色过度，则阳性菌可被误染为阴性菌；

而脱色不够时，阴性菌可被误染为阳性菌。此外，菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时间

过长，或已死亡及部分菌体自行溶解，都常呈阴性反应。

3.

结果观察：革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。以均匀分散开的细菌的革兰氏

染色反应为准，过于密集的细菌，常常呈现假阳性。